Disolisyon nan polipèptid
Chak asid amine gen pwopriyete chimik nannan epi solubilite yon peptide depann de sekans ak modifikasyon li yo. Nou rekòmande pou pran yon ti kantite peptide a pou tès solubilite anvan ou fonn tout peptides yo.
Dissoud peptides se yon etap trè enpòtan. Move solubilizasyon ka lakòz pèt peptide oswa echèk eksperimantal. Solibilite nan peptides sitou depann sou sekans peptide a, kidonk peye atansyon lè w ap desine peptide a. Li rekòmande ke sekans peptide a ta dwe genyen 20% résidus chaje pou ogmante solubilite li yo.
Anvan w itilize, kliyan yo ka swiv twa prensip debaz sa yo pou chwazi yon sòlvan apwopriye pou fonn peptide a.
Premyèman, sòlvan yo chwazi a dwe kapab konplètman fonn peptide a; Dezyèmman, sòlvan yo chwazi a dwe konpatib ak kondisyon eksperimantal yo; Finalman, sòlvan yo chwazi a pa dwe reyaji ak oswa degrade peptide a.
Osi lontan ke kantite peptide pèmèt, ou ka premye fonn yon ti pòsyon nan peptide a ak Lè sa a, fonn echantiyon an antye. Si ou bezwen refè peptide a nan yon sòlvan, ou ka chwazi yon sòlvan inisyal ki fè li fasil retire apre liofilizasyon.
Sijesyon sa yo ka ede w fonn peptides:
Peptides ki gen mwens pase 5 asid amine yo jeneralman idrosolubl nan solisyon akeuz, ak asid amine fò idrofob (W, I, L, F, M, V, Y) eksepte.
If the charged amino acids are evenly distributed throughout the sequence, then contains >25% Chaje asid amine (E, D, K, R, H) nan peptides idrofil ak ki genyen<25%Peptides with hydrophobic amino acids are generally soluble in aqueous solutions. The purification system for peptides is generally 0.1% TFA/Water and 0.1% TFA/ ACN. Therefore, if the peptide is dissolved in a buffer with no or very weak buffering capacity, the result may be an acidic peptide solution. When using other methods to dissolve peptides, be sure to use a solvent that is pH The value is nearly neutral. acidic peptide (E+D The number of residues is more than K+R+H number of residues) and basic peptides (K+R+H The number of residues is more than E+D number of residues) in neutral pH value conditions than in acidic pH value is easier to dissolve.
For hydrophobic amino acid content is 50% ～75%peptide, even if the sequence contains >25% Chaje asid amine yo ka ensolubl oswa pasyèlman idrosolubl nan dlo. Li pi bon pou premye fonn peptide a nan yon kantite minimòm yon sòlvan òganik fò tankou DMF, ACN, alkòl Isopropyl, etanòl, asid acetic, 4-8 M GdnHCl, ure, oswa DMSO (pa nan sekans C, W, M), ak lòt solvang òganik ki sanble. Li pi bon pou ajoute tou dousman sòlvan òganik ki fonn peptide a nan solisyon akeuz gout pa gout. Si solisyon an vin twoub, li ka rive nan limit solubilite epi pa gen okenn itilizasyon pou kontinye fonn li. Li ta dwe remake ke sòlvan an okòmansman chwazi yo ta dwe konpatib ak sistèm nan eksperimantal.
Hydrophobic amino acid content >75% Peptid fòtman idrofob yo jeneralman ensolubl nan solisyon akeuz. Peptid sa yo ta dwe trete tou an premye ak sòlvan òganik fò (tankou TFA, asid fòmik) fonn epi yo ka presipite tou si yo ajoute nan yon solisyon akeuz. Solisyon peptide final la ka mande pou gwo konsantrasyon Solvang òganik pou denatire li, epi Solvang òganik yo jeneralman yo pa itilize pou etid fonksyon byolojik nan selil k ap viv yo.
S, T, E, D, K, R, H, N, Q, Y High content (>75%) Sekans polipeptid yo gen tandans fòme rezo lyezon idwojèn entèmolekilè redondants epi fasil fòme jèl nan solisyon akeuz konsantre. Peptid sa yo ka solubilize jan sa dekri nan etap 3. Yo nan lòd yo diminye pwoblèm posib pandan yap divòse, li rekòmande ke kliyan peye plis atansyon sou konsepsyon an ak sekans amelyore solubility nan peptide a.