Reyaktif pou kondansasyon peptide

Kounye a, nan sentèz peptides, metòd aktivasyon carboxyl yo pwensipalman itilize pou konplete reyaksyon peptide yo. Metòd ki pi bonè yo te itilize yo te aktive asid amine nan klori asid, azid, anidrid simetrik ak anidrid asid melanje. Sepandan, akòz egzistans racemization asid amine nan kondisyon sa yo, danje reyaksyon reyaksyon ak konpleksite preparasyon yo, yo te piti piti ranplase pa reyaktif kondansasyon pita, ki ka divize an de kalite dapre estrikti yo.: Reyaktif kondansasyon prensipal yo se: kalite Carbodiimide, kalite sèl onyòm (Uronyòm).

Sitou enkli: DCC, DIC, EDC.HCl tann. sèvi ak DCC pote soti nan reyaksyon an, akòz DCU a, egziste DMF Li gen trè ti solubility ak pwodui presipite blan, kidonk li se jeneralman yo pa itilize nan sentèz solid-faz. Sepandan, paske li se bon mache, li ka retire pa filtraj nan sentèz faz likid -, epi li toujou lajman itilize. EDC.HCl Paske nan solubility dlo li yo, li se souvan itilize nan koneksyon an nan polipèptid ak pwoteyin, epi li se tou byen siksè. Sepandan, youn nan pi gwo dezavantaj yo nan kalite sa a reyaktif kondansasyon se ke si yo itilize pou kont li, pral gen plis reyaksyon segondè. Sepandan, rechèch montre ke si yo ajoute pandan pwosesis deklanchman HOBt, HOAt sa yo reyaktif ka kontwole reyaksyon segondè nan yon seri trè ba. Mekanis reyaksyon an se jan sa a:

Figi 2 DIC Mekanis reyaksyon Aktivasyon

Onium sèl kalite kondansasyon reyaktif yo gen gwo reyaksyon ak vitès vit, epi kounye a yo lajman itilize, sitou ki gen ladan: HBTU, TBTU, HATU, PyBOP tann. Pandan itilizasyon reyaktif sa a, ou bezwen ajoute yon baz òganik, tankou diisopropylethylamine (DIEA), N- Methylmorpholine (NMM), asid amine a ka aktive sèlman apre yo fin ajoute reyaktif sa a. Mekanis reyaksyon an se jan sa a:

Rezin yo itilize nan sentèz peptides solid-faz yo jeneralman polystyrène-divinylbenzèn materyèl, ak gwosè ki sòti nan 75 a 150 μm, degre nan kwa-lyezon se ant 1-2%, ak pi fò nan sa yo ki itilize kounye a se 1% nan kwa, paske nan degre DCM nan sa a, DCM. Li gen bon pwopriyete anfle epi li gen yon estrikti rezo twa dimansyon, ak molekil reyaktif yo ka deplase libète andedan résine a. Pati ki pi kritik nan résine a se bra a konekte, ki konekte ak résine a nan yon bout epi li sèvi kòm yon sit reyaksyon nan lòt bout la. Rezin yo lajman itilize kounye a se: PAM, MBHA, Wang, 2-Cl-Trt, Rink-Amide-MBHA tann. nan PAM, MBHA yo itilize nan estrateji BOC, paske li trè estab nan asid, li bezwen HF, TFMSA Li ka sèlman koupe anba kondisyon asid fò.

Apre sentèz peptide solid -faz la fini, yo dwe chwazi yon reyaktif klivaj apwopriye pou fann peptide a soti nan résine a, epi apre sa presipite ak etè glacial, kolekte presipite a pa santrifujasyon, ak HPLC Separe, pirifye, epi friz- pou jwenn pwodwi peptide final la.

Akòz diferan rezin yo ak sekans asid amine yo chwazi, metòd klivaj yo chwazi pandan klivaj yo pa egzakteman menm. Anjeneral, kondisyon yo klivaj yo chwazi nan kondisyon asid. Pou PAM, MBHA Resin, jeneralman itilize HF Koupe, p-kresol, p-mercaptophenol, anisol ak lòt reyaktif bezwen ajoute pandan pwosesis la koupe. Ak pou Wang, Rink-Amide, Trt Resin, jeneralman itilize TFA Koupe, ajoute ethylene glycol, anisol sulfid, dlo, triisopropylsilane, fenol, elatriye pandan pwosesis la koupe.

Reyaktif aditif sa yo pwensipalman itilize kòm reyaktif kaptire carbocation. Objektif la se pran carbocation ki te pwodwi pandan reyaksyon klivaj la epi redwi reyaksyon segondè ki te koze pa atak iyon carbocation sa yo sou kèk chenn bò sid amine. Asid amine yo ki gen plis chans pou pwodui reyaksyon segondè yo enkli: Trp, Tyr. Dòz la nan reyaktif koupe se jeneralman 10-15 ml / g résine.

Rapò koupe souvan itilize: HF/p-cresol/p-thiocresol (90/5/5), TFA/TIS/EDT/H2O (94/1/2.5/2.5), reyaksyon an anjeneral te pote soti nan tanperati chanm 2 h-4h.

Nan sentèz peptide solid-faz, nou souvan rankontre pwoblèm nan echèk sentèz peptide oswa efikasite sentèz ki ba. Rezon prensipal la se akòz sekans peptide a, paske gen kèk sekans peptide ki fòme sou résine a . - Pliye chanje pwopriyete yo anfle nan résine a, epi li ka tou antere sit yo aktif nan reyaksyon an nan résine a, ki fè li difisil pou reyaksyon an kontinye. Rapò aktyèl yo endike sa

Sèvi ak solvants melanje, DMSO/DMF, 6N Guanidine/DMF solisyon

Ogmante tanperati reyaksyon an oswa itilize metòd mikwo ond lan

Sèvi ak sèl chaotropic, LiCl, NaClO4 tann.

Sèvi ak sa ki gen pi bon pwopriyete anfle PEG-PS résine, pandan y ap diminye chaj la résine (0.05-0.2 mmol/g)

​